恭喜吉林國健生命工程科學技術有限公司吳昊獲國家專利權
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龍圖騰網恭喜吉林國健生命工程科學技術有限公司申請的專利一種NK細胞的規模化培養方法及采用的培養基獲國家發明授權專利權,本發明授權專利權由國家知識產權局授予,授權公告號為:CN119286781B 。
龍圖騰網通過國家知識產權局官網在2025-03-25發布的發明授權授權公告中獲悉:該發明授權的專利申請號/專利號為:202411834436.0,技術領域涉及:C12N5/0783;該發明授權一種NK細胞的規模化培養方法及采用的培養基是由吳昊;竇柏蕊;閆璐;張亞超;馮悅;周云竹;趙越設計研發完成,并于2024-12-13向國家知識產權局提交的專利申請。
本一種NK細胞的規模化培養方法及采用的培養基在說明書摘要公布了:本發明提出了一種NK細胞的規模化培養方法及采用的培養基,屬于NK細胞培養技術領域。在ACTM培養基中加入胎牛血清、青霉素、鏈霉素、刺激擴增促進磁性微球,攪拌混合均勻,制得培養基。本發明提供了一種NK細胞的規模化培養方法,能夠高效激活擴增NK細胞、無自體血清使用、安全有效,能夠較好的促進NK細胞增殖,延長其活力,且安全無副作用,具有廣闊的應用前景。
本發明授權一種NK細胞的規模化培養方法及采用的培養基在權利要求書中公布了:1.一種培養基,其特征在于,在ACTM培養基中加入胎牛血清、青霉素、鏈霉素、刺激擴增促進磁性微球,攪拌混合均勻,制得培養基;所述刺激擴增促進磁性微球的制備方法如下:S1.將氯化鐵、氯化亞鐵和親水乳化劑溶于水中,制得水相;將正硅酸烷基酯、親油乳化劑溶于乙酸乙酯中,制得油相;將水相滴加入油相中,乳化,滴加氨水,加熱攪拌反應,離心,洗滌,干燥,煅燒,制得包覆磁性四氧化三鐵的二氧化硅球;所述氯化鐵、氯化亞鐵、親水乳化劑、正硅酸烷基酯、親油乳化劑的質量比為3.24:1.26:0.2-0.5:3-5:0.1-0.2;所述滴加氨水調節溶液pH值為9-10,所述加熱攪拌反應的溫度為70-80℃,時間為4-7h,所述乳化的轉速為5000-8000rmin,時間為15-25min,所述干燥的溫度為60-70℃,時間為2-4h,所述煅燒的溫度為500-700℃,時間為1-2h;S2.將包覆磁性四氧化三鐵的二氧化硅球加入水中,加入單寧酸和催化劑,加熱攪拌反應,磁鐵分離,洗滌,干燥,制得改性包覆磁性四氧化三鐵的二氧化硅球;所述包覆磁性四氧化三鐵的二氧化硅球、單寧酸和催化劑的質量比為10:3-4:0.5-1;所述催化劑的pH值為8.5-9.5的Tris-HCl溶液,所述加熱攪拌反應的溫度為40-50℃,時間為3-5h;S3.將改性包覆磁性四氧化三鐵的二氧化硅球加入水中,加入NHS和EDC,攪拌活化,加入藻藍蛋白和絲素蛋白肽,攪拌反應,磁鐵分離,洗滌,冷凍干燥,制得蛋白偶聯改性包覆磁性四氧化三鐵的二氧化硅球;所述改性包覆磁性四氧化三鐵的二氧化硅球、NHS、EDC、藻藍蛋白和絲素蛋白肽的質量比為10:2-3:1-3:2-3:4-5,所述攪拌活化的時間為20-30min,所述攪拌反應的時間為10-12h;S4.將蛋白偶聯改性包覆磁性四氧化三鐵的二氧化硅球加入水中,加入NHS和EDC,攪拌活化,加入細胞復合因子,攪拌反應,磁鐵分離,洗滌,冷凍干燥,制得刺激擴增促進磁性微球;所述蛋白偶聯改性包覆磁性四氧化三鐵的二氧化硅球、NHS、EDC和細胞復合因子的質量比為10-12:2-3:1-3:4-5,所述細胞復合因子為IL-15和IL-12,質量比為10:3-7;所述攪拌活化的時間為20-30min,所述攪拌反應的時間為8-10h。
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