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龍圖騰網(wǎng)恭喜安徽大學(xué)申請的專利一種基于Ｉ型Cas系統(tǒng)中Cas7和Cas3的原核生物基因編輯方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號為：CN107475169B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-04-25發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為：201710851385.6，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N1/21；該發(fā)明授權(quán)一種基于Ｉ型Cas系統(tǒng)中Cas7和Cas3的原核生物基因編輯方法是由童望宇;楊興旺;曹素麗設(shè)計研發(fā)完成，并于2017-09-19向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本一種基于Ｉ型Cas系統(tǒng)中Cas7和Cas3的原核生物基因編輯方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明首次公開了一種基于Ｉ型Cas系統(tǒng)中Cas7和Cas3的原核生物基因編輯方法，包括蛋白表達(dá)質(zhì)粒、基因編輯質(zhì)粒及基因編輯過程。原核生物中該雙基因即可分開轉(zhuǎn)錄也可位于同一操縱子同時轉(zhuǎn)錄，故該方法對原核生物基因組可方便、靈活、有效地進(jìn)行基因編輯；可望有效地應(yīng)用于基礎(chǔ)生物科學(xué)及制藥、食品、農(nóng)業(yè)等其它領(lǐng)域。

本發(fā)明授權(quán)一種基于Ｉ型Cas系統(tǒng)中Cas7和Cas3的原核生物基因編輯方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種基于I型Cas系統(tǒng)中Cas7和Cas3的原核生物基因編輯方法，其特征在于：具體包括以下步驟：1蛋白表達(dá)質(zhì)粒plasmid-cas7-3的構(gòu)建根據(jù)載體相關(guān)序列信息設(shè)計用于連接cas基因的引物，通過PCR反應(yīng)擴(kuò)增得到線性化克隆載體；根據(jù)維吉尼亞鏈霉菌IBL14中cas7與cas3基因及相關(guān)序列信息設(shè)計引物，以提取到的維吉尼亞鏈霉菌IBL14基因組為模板，通過PCR反應(yīng)擴(kuò)增得到末端帶有與載體有15-25bp重疊區(qū)域及含有重疊區(qū)的cas7與cas3兩個基因，并通過overlapPCR方式將cas7與cas3基因連接起來，最后再將overlapPCR產(chǎn)物通過一步法連接到線性質(zhì)粒上，得到蛋白表達(dá)質(zhì)粒plasmid-cas7-3；2基因編輯質(zhì)粒plasmid-tg-DNA的構(gòu)建根據(jù)原核生物靶向基因DNA序列信息設(shè)計引物，以提取到的原核生物基因組為模板，通過PCR反應(yīng)分別擴(kuò)增得到末端帶有限制性內(nèi)切酶切割位點以及overlapPCR互補序列的靶向基因的上、下游同源臂片段，并用overlapPCR將上、下游同源臂片段連接起來構(gòu)建基因編輯模板t-DNA，同時根據(jù)原核生物靶向基因序列信息設(shè)計并化學(xué)合成首尾分別含T7啟動子和RNA終止子的靶向基因片段g-DNA，將t-DNA與g-DNA連接到質(zhì)粒上得基因編輯質(zhì)粒plasmid-tg-DNA；3基因編輯重組子的構(gòu)建與檢驗制備原核生物感受態(tài)細(xì)胞，并將按步驟1得到的pIasmid-cas7-3和按步驟2得到的pIasmid-tg-DNA同時或分別轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞中得到候選的基因編輯的重組子，對重組子直接進(jìn)行單克隆PCR或提取基因組PCR，并進(jìn)一步通過基因測序，以確證編輯后的目的重組子；所述的原核生物指大腸桿菌或枯草芽孢桿菌。

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