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龍圖騰網(wǎng)恭喜蘇州奎克泰生物技術(shù)有限公司申請的專利一種快速檢測中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)的方法獲國家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國家知識產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號為：CN119534239B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-04-18發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請?zhí)?專利號為：202510108646.X，技術(shù)領(lǐng)域涉及：G01N15/01；該發(fā)明授權(quán)一種快速檢測中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)的方法是由王渺得;楊志軍;王蕊;焦慧宇設(shè)計研發(fā)完成，并于2025-01-23向國家知識產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請。

本一種快速檢測中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)的方法在說明書摘要公布了：本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速檢測中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)的方法。所述方法包括以下步驟：1取人全血樣本，加入溶血劑，再加入混合熒光抗體染色液，震蕩混勻后，室溫靜置孵育；2步驟1孵育后離心，吸棄上清，使用洗滌液洗滌后離心，吸棄上清；3加入洗滌液重懸細胞；4采用流式細胞儀進行檢測。檢測方法穩(wěn)定性好，可重復(fù)性強，熒光強度高，可用于疾病的輔助診斷。

本發(fā)明授權(quán)一種快速檢測中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)的方法在權(quán)利要求書中公布了：1.一種快速檢測中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)的方法，其特征在于，包括以下步驟：1取人全血樣本，加入溶血劑，再加入混合熒光抗體染色液，震蕩混勻后，室溫靜置孵育；2步驟1孵育后離心，吸棄上清，使用洗滌液洗滌后離心，吸棄上清；3加入洗滌液重懸細胞；4采用流式細胞儀進行檢測；步驟1中，所述混合熒光抗體染色液的制備方法，包括以下步驟：11制備改性八臂聚乙二醇：111將無水乙醇與去離子水的混合溶液超聲除氣，將八臂聚乙二醇羥基、APTES混合，加入超聲除氣的無水乙醇與去離子水的混合溶液中，在N2保護下超聲處理后，加入氨水調(diào)節(jié)pH值，振搖，得到混合液；112向步驟111所得混合液中加入氯己烷，升溫，攪拌，靜置，離心，沉淀洗滌，干燥，得到改性八臂聚乙二醇；12制備脂質(zhì)體@修飾GO-熒光染料：121將氧化石墨烯固體樣品分散到蒸餾水中，間歇超聲，得到處理后GO溶液，取處理后GO溶液加入溶液，超聲，取步驟112所得改性八臂聚乙二醇加入，超聲，攪拌，離心，沉淀洗滌，干燥，得到修飾的GO；122將DMPG、DPPE溶于氯仿甲醇溶液中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，減壓蒸干有機溶劑，干燥，加入超純水，水浴超聲得到水化的脂質(zhì)體溶液，過0.22μm膜，得到脂質(zhì)體溶液；123將10mgmL染料水溶液與1mgmL的步驟121所得的修飾的GO水溶液混合，攪拌，得到染料-GO液，將染料-GO液與步驟122所得脂質(zhì)體溶液混合，冰水浴超聲處理，離心，上清液超濾離心，得到脂質(zhì)體@修飾GO-熒光染料；13制備脂質(zhì)體熒光標記抗體：131將S-SMCC溶解于無菌水內(nèi)配置成10mgmL的S-SMCC溶液，將步驟123所得脂質(zhì)體@修飾GO-熒光染料以15mgmL的量分散于超純水中得到脂質(zhì)體@修飾GO-熒光染料分散液，向分散液中加入S-SMCC溶液反應(yīng)；132步驟131反應(yīng)完成后，加入含有EDTA的PBS緩沖液，進行脫鹽處理，收集脫鹽后產(chǎn)物，用純水定容，得到脂質(zhì)體@修飾GO-熒光染料-S-SMCC溶液；133將MPO抗體用PBS稀釋至2mgmL得到抗體液，用PBS溶解Sulfo-LC-SPDP至濃度為0.05mgmL，向抗體液中添加Sulfo-LC-SPDP溶液，使Sulfo-LC-SPDP終濃度為1.5μgmL，加入PBS至抗體濃度為0.5mgmL反應(yīng)，脫鹽處理，用純水定容得到抗體定容液；134用PBS溶解TCEP到終濃度0.05mgmL，添加TCEP溶液至步驟133所得抗體定容液中，使TCEP終濃度為1μgmL，避光反應(yīng)，脫鹽處理，定容，獲得McAb-SH中間體溶液；135將步驟132與步驟134得到的脂質(zhì)體@修飾GO-熒光染料-S-SMCC溶液和McAb-SH中間體溶液混合均勻，避光反應(yīng)，反應(yīng)完成后向反應(yīng)體系內(nèi)加入含有1%BSA、馬齒莧提取物0.3mgmL、苦楝提取物0.2mgmL的0.1mgmLPBS溶液定容至抗體終濃度為0.1mgmL，得到MPO脂質(zhì)體熒光標記抗體液；14制備混合熒光抗體染色液：采用步驟13的方法制得MPO、CitH3、CD66c和CD45脂質(zhì)體熒光標記抗體液，混合均勻配置成混合熒光抗體染色液；步驟135中，所述馬齒莧、苦楝提取物的制備步驟如下：將馬齒莧和苦楝洗凈后80℃烘干，粉碎過100目篩，加入10倍質(zhì)量體積的去離子水中，70-80℃水浴加熱，400-500rpm攪拌1-2h后，8000rpm離心5min過濾，將濾液再次繼續(xù)上述加熱攪拌6h，8000rpm離心5min過0.22μm微膜過濾，-20℃冷凍干燥12h，獲得提取物。

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